人SV40轉染成骨細胞HFOB1.19性能參數(shù)科研

在進行細胞傳代培養(yǎng)的時候，胰蛋白酶作用的時間是在1～3分鐘，由于我有好幾個培養(yǎng)瓶（4個以上）的細胞都需要進行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個培養(yǎng)瓶一個培養(yǎng)瓶這么分開做，還是可以幾個同時做呢？同時做我怕后來操作的培養(yǎng)瓶中的細胞消化過度??！一個一個的做會不會又太費時呢？

培養(yǎng)基 D-MEM/F-12培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12400024，添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L)，90%；0.3mg/ml G418；優(yōu)質胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：33.5攝氏度。
生長特性 貼壁生長

1、一個一個做！防止污染，和消化細胞時間的不均勻。

2、原則上，為了避免細胞系之間的污染，應該一個一個的做。但是如果你能保證無菌操作的原則，人SV40轉染成骨細胞HFOB1.19性能參數(shù)科研也能把握好各種貼壁細胞系消化的時間，是可以同時做，這樣效率高。建議你剛開始一個一個的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。

3、4個可以同時做，時間到了用移液槍給4個瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。

4、新手的話強烈建議一個一個處理細胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細胞對消化都不敏感，不然很容易消化過度或者不到位。另外同時處理多個細胞容易出現(xiàn)細胞間交叉污染，一旦污染基本沒救，比細菌污染還要麻煩。

5、剛開始還是一個一個來，人SV40轉染成骨細胞HFOB1.19性能參數(shù)科研消化的時間與細胞的來源有很大關系，貼壁性強的細胞，需要消化的時間較長。一般除了貼壁性強的癌細胞外，細胞消化時間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關系，濃度高的消化時間要短一些，不然會消化過了，對于細胞的生長不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見細胞開始變亮，皺縮，卷邊的時候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。

失敗的關鍵原因還是細胞復蘇的時候沒有迅速解凍的緣故，后一次成功是因為注意到這個問題。細胞的復蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果hFOB 1.19人SV40轉染成骨細胞取出后沒有在盡可能短的時間里解凍的話細胞內部會產(chǎn)生很多冰晶對細胞就有致命的損失了。另外，細胞的確應該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細胞，放-80度保存恐怕不到三個月就不行了，并且狀態(tài)會很差。ZYC3821    神經(jīng)前體細胞培養(yǎng)基    NPrCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3822     神經(jīng)細胞培養(yǎng)基    NM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3823     少突膠質前體細胞培養(yǎng)基    OPCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3824     球狀少突細胞培養(yǎng)基    OsM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3825     角質細胞培養(yǎng)基    KM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3826     角質細胞培養(yǎng)基（確定）     KM-d    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3827    成纖維細胞培養(yǎng)基    FM-sf    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3828    扁桃體上皮細胞培養(yǎng)基    TEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3829     口腔角質細胞培養(yǎng)基    OKM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3830    結腸上皮細胞培養(yǎng)基    CoEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3831     支氣管上皮細胞培養(yǎng)基    BEpiCM    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 

人SV40轉染成骨細胞HFOB1.19性能參數(shù)科研

使用權限 A類注意事項：
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件;建議直接購買提供的*培養(yǎng)基。
5. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通交流。
培養(yǎng)溫馨提示：
1）公司努力實現(xiàn)為科學研究提供實驗細胞技術服務。所提供的實驗細胞及其子代，不能用于人體實驗和臨床診斷、治療。
2）公司細胞資源中心承諾盡zui大努力對實驗細胞資源相關信息進行及時更新。但限于我們的技術條件，中心不保證其準確性。
3）從文獻等處引用的信息本中心未進行核實，僅供參考。
 

 
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。