PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒說明書
PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號來定量樣品中DNA含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、 成功實驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產(chǎn)品嚴 格無菌,即到即用,性能穩(wěn)定,高度敏感。
技術(shù)背景:
作為 DNA 染色劑之一的 PicoGreen 熒光染料特異性地與樣品中雙鏈 DNA 結(jié)合,產(chǎn)生熒光信號。PicoGreen 技術(shù)可以檢測到低達 0.5 納克雙鏈 DNA 的變化。DNA 的微量增加引起熒光信號強度(Intensity)或相對熒 光單位(RFU)的顯著增加。其自發(fā)熒光(Autofluorescence)忽略不計,重復(fù)性標準差異(Standard Deviation) 低,不受樣品化學(xué)成分的干擾。
產(chǎn)品內(nèi)容:
染色液(Reagent A) 微升
稀釋液(Reagent B) 毫升
標準液(Reagent C) 毫升
產(chǎn)品說明書 1 份
保存方式:
保存 染色液(Reagent A)和 標準液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在 4℃冰箱里, 染色液(Reagent A)避免光照,有效保證6個月
用戶自備1.5 毫升離心管:用于工作液配制的容器比色皿或 96 孔板:用于熒光分析的容器 熒光分光光度儀或熒光酶標儀:用于熒光定量分析
PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒實驗步驟:
一、 測定準備:
1.準備好待測樣品,置于冰槽里
2.設(shè)定好熒光分光光度儀(溫度為 37℃):激發(fā)波長 480nm,散發(fā)波長 530nm,并置零
3.實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出 xx 毫升 稀釋液(Reagent B)到新的 1.5 毫升離心管,加入 xx 微升 染色液(Reagent A),混勻后,用錫紙包裹,標記為染色工作液,放在暗室里。然后進行下列操作。
二、 構(gòu)建標準曲線:
1.準備好 5 個 1.5 毫升離心管,標記為 1 至 5 號管
2.分別加入 xx 微升 稀釋液(Reagent B)到每個離心管
3.移取 xx 微升 標準液(Reagent C)到 1 號管,混勻
4. 小心移取 xx 微升 1 號管稀釋的 標準液(Reagent C)到 2 號管,混勻
5.小心移取 xx 微升 2 號管稀釋的 標準液(Reagent C)到 3 號管,混勻
6. 小心移取 xx 微升 3 號管稀釋的 標準液(Reagent C)到 4 號管,混勻
7.將 1 至 5 號管放進冰槽里備用;標準管含量見下表:
管號 | 緩沖液(Reagent B) | 標準液(Reagent C) | 標準 DNA 總量 |
1 | xx 微升 | xx 微升 | xx 微克 |
2 | xx 微升 | xx 微升 1 號管 | xx 微克 |
3 | xx 微升 | xx 微升 2 號管 | xx 微克 |
4 | xx 微升 | xx 微升 3 號管 | xx 微克 |
5 | xx 微升 | 空對照 | 0 |
8.移取 xx 微升含有 染色液(Reagent A)和 稀釋液(Reagent B)的 染色工作液到新的比色皿
9.加入 500 微升上述配制的標準液
10.室溫下,孵育 5 分鐘,避免光照
11.即刻放進熒光分光光度儀測讀:獲得相對熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
12.重復(fù)實驗步驟 8 至 11 四次
13.繪制標準曲線:縱座標(Y 軸)為相對熒光單位(RLU);橫坐標(X 軸)為 DNA 含量(微克)
三、 樣品檢測
1.移取 xx 微升含有 染色液(Reagent A)和 稀釋液(Reagent B)的 染色工作液到新的比色皿
2.加入 500 微升待測樣品
3.室溫下,孵育 5 分鐘,避免光照
4.即刻放進熒光分光光度儀測讀:獲得相對熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
5.根據(jù)標準曲線獲得樣品對應(yīng) DNA 含量(微克)
6.樣品實際 DNA 濃度:
PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒注意事項:
1.本產(chǎn)品為 20 次(比色皿)和 100 次(96 孔板)操作,包括標準曲線測定
2.操作時,須戴手套
3.使用新鮮配制的 染色工作液,務(wù)必不要超過 2 小時,且注意避光
4.建議使用塑料管配制 染色工作液,而不是玻璃制品
5.孵育時,避免光照
6.系統(tǒng)檢測,標準曲線測定 1 次即可;如果儀器更換,則需要重新測定 1 次
7.如果熒光讀數(shù)過高,可以相應(yīng)稀釋樣品量
8.可以使用熒光酶標儀檢測,試劑用量和體系均除以 5,包括標準 DNA 含量,其計算公式[根據(jù)標準曲線獲得樣品對應(yīng)DNA 濃度(微克)X樣品稀釋倍數(shù)]÷0.1(樣品容量;毫升)=微克/毫升
9.鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈 DNA 和 RNA 不會干擾檢測
10.本公司提供系列DNA檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準:
1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定高度敏感
使用承諾:
上海滬崢秉著“信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴格的質(zhì)量鑒定,保證 說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題,請立即以書面形式(實驗報告)與本公司,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負責更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致,本公司不承擔由此造成的損失。
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